依据聚合物的沉积技能一般包含将样本与含聚合物的沉积溶液混合,在4℃温育并低速离心。
外泌体研讨继续升温,简直一切研讨者都面对这样一个问题:怎么取得足够多的高纯度外泌体。外泌体的提取办法有许多,但提取的外泌体含量、纯度等各有优缺点,咱们先来了解下几种常用的外泌体别离办法。
差速离心法是依据不同蛋白质分子及囊泡、细胞及细胞碎片等在均匀悬液中沉降速度的差异,经过逐步添加离心力或离心时刻,别离沉积或上清的办法来提取。
3)超高速离心沉积外泌体,然后用0.22μm的滤膜去除凋亡小体、微泡等进一步纯化。 差速离心法简略易操作,合适大体积样本中外泌体的别离、提取,不适用于微量及宝贵样本的研讨。
现在运用较多的是蔗糖密度梯度离心法,将细胞混合悬液或匀浆置于蔗糖介质的顶部,经过离心力的效果使细胞分层、别离,将外泌体从稠浊物质中别离出来,然后运用滤膜进一步纯化。 蔗糖密度梯度离心法获取的外泌体纯度高,已作为药物载体用于临床试验。但前期准备工作繁琐,操作杂乱耗时长。
qEV是选用尺度排阻SEC原理依照分子粒径进行分段别离的办法。将生物样品流经具有固定孔隙的SEC填充物,吸附粒径较小的分子如蛋白、脂类等,而较大粒径的分子或颗粒不能进入孔隙。在缓冲液的效果下,较大粒径的囊泡(外泌体)流速快,在特定的阶段会被洗脱出来进入样品搜集管,成为试验样品。而小分子具有较长的保存时刻,最终被洗脱出来。
qEV技能有很大成效避免了超速离心和密度梯度离心等传统办法别离囊泡(外泌体)时,因为超高离心力与蔗糖溶液高粘性形成的HDL蛋白或囊泡的集合污染,也避免了传统办法关于囊泡(外泌体)的膜结构的损害,使其保存完好的生物活性;不过,该办法耗时较长,不合适很多样本处理。
依据聚合物的沉积技能一般包含将样本与含聚合物的沉积溶液混合,在4℃温育并低速离心。用于聚合物沉积的最常见聚合物之一是聚乙二醇(PEG)。用这种聚合物沉积具有许多长处,包含对别离的外泌体影响小、pH中性等。现在大多数快速别离外泌体的商品化试剂盒都是依据此办法。 但是依据聚合物的沉积办法可能会一起别离非囊泡污染物(包含脂蛋白)外泌体纯度不高。